口蹄疫病毒以傳播速度快,發(fā)病率高被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)和聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)列為A類烈性傳染病,我國將其列為一類傳染病。目前,發(fā)達國家控制FMD主要采取撲殺,無害化處理等措施,從源頭控制FMD的流行;亞洲、非洲、歐洲一些國家主要以疫苗免疫來防控口蹄疫的發(fā)生與流行。疫苗免疫后抗體效價的評價,這就需要根據(jù)免疫計劃,定時采血評價免疫效果。以下是本實驗室通過三種試劑盒對同一批血樣檢測結(jié)果的分析。
正向間接血凝試驗是將抗原吸附(致敏)于與免疫無關(guān)的顆粒性載體(紅細胞)表面,然后與相應(yīng)的抗體作用,在適宜電解質(zhì)存在的條件下發(fā)生肉眼可見的特異性凝集現(xiàn)象。在基層動物防疫工作中,由于各方面條件不足,為了準(zhǔn)確進行免疫效果評估和疫情預(yù)測,正向間接血凝試驗成為小型養(yǎng)殖戶和基層試驗方法。
口蹄疫O型抗體快速檢測卡采用夾心法設(shè)計。將膠體金顆粒標(biāo)記的純化口蹄疫病毒O型抗原1噴吐于結(jié)合墊上,干燥備用。而將純化的口蹄疫病毒O型抗原2和口蹄疫病毒O型抗體IgG調(diào)整至工作濃度,分別噴涂于NC膜的檢測帶(T)和質(zhì)控帶(C)上。稀釋好的樣品血清從樣品墊流向金標(biāo)成品膜。樣品中所含的抗體會在檢測帶的位置上與標(biāo)記的抗原結(jié)合發(fā)生相應(yīng)的反應(yīng)。質(zhì)控帶上發(fā)生的反應(yīng)用以確定試紙條上液體正確的流向。
液相阻斷ELISA是將預(yù)先滴定好的病毒抗原與被檢血清首先在液相中反應(yīng),然后將抗原抗體復(fù)合物轉(zhuǎn)移到包被了口蹄疫特異性抗體的ELISA板中,沒有*被血清抗體阻斷的病毒抗原ELISA板中抗體捕獲,再通過酶結(jié)合物與底物顯色。按照試驗孔呈現(xiàn)顏色。通過酶標(biāo)儀讀值,來判定抗體效價。
正向間接血凝 (HIA)、液相阻斷ELISA、金標(biāo)試紙條是現(xiàn)階段常用的口蹄疫O型抗體檢測方法,但在實際應(yīng)用中過程中仍存在某些問題,主要是不同檢測方法的檢測結(jié)果存在差異,造成結(jié)果解釋困難。為更好分析實際檢測結(jié)果,科學(xué)理解和選擇檢測方法,本試驗選用了3種不同的檢測方法進行對比試驗,對口蹄疫O型抗體不同檢測方法之間的一致性和差異性結(jié)果進行了詳細全面分析。