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更新時(shí)間:2024-07-04
簡(jiǎn)要描述:
檢測(cè)原理LSI 豬流感抗體檢測(cè)試劑盒(CIVTEST SUIS Influenza)是利用間接ELISA 方法建立的。特異的豬流感病毒被包被在96 孔板上。在反應(yīng)過程中,檢測(cè)樣本被加入反應(yīng)孔中,樣本中的特異性抗體會(huì)與孔中包被的特異性抗原反應(yīng),在洗板的過程中不會(huì)被清洗掉,當(dāng)添加酶標(biāo)復(fù)合物時(shí),這些酶標(biāo)復(fù)合物就會(huì)與豬的抗體發(fā)生反應(yīng)。沒有結(jié)合的酶標(biāo)復(fù)合物在洗板的過程中被清洗。在加入對(duì)氧化酶敏感的可以顯色
豬流感病毒抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
使用說明書
包裝規(guī)格
96T×1/盒
檢測(cè)原理
本試劑盒由預(yù)包被豬流感病毒重組蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測(cè)豬血清、血漿樣本中豬流感病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬流感病毒抗體,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,在孔中加TMB底物液,與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬流感病毒抗體。
試劑盒組成
儲(chǔ)存及有效期
2~8℃保存,有效期12個(gè)月。
包被板開封后請(qǐng)于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
適用儀器
含450nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀,37℃恒溫設(shè)備,可調(diào)微量移液器。
樣品準(zhǔn)備
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長(zhǎng)期需置-20℃保存。
2.根據(jù)樣本數(shù)量準(zhǔn)備對(duì)應(yīng)數(shù)量的小刻度EP管或血清稀釋盤,用樣品稀釋液將待檢血清按50倍稀釋(如4μl血清加入196μl樣品稀釋液中,混勻)陰性、陽性對(duì)照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水加1份濃縮洗滌液)。
檢驗(yàn)方法
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)陰性、陽性對(duì)照各1孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰性、陽性對(duì)照孔分別加入陰性、陽性對(duì)照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃溫箱孵育30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加250ul工作洗滌液,用震蕩混勻的方式洗滌60秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,每次洗滌后需拍干液體。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.甩去孔內(nèi)液體,每孔加250ul工作洗滌液,用震蕩混勻的方式洗滌60秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,每次洗滌后需拍干液體。
8.根據(jù)樣本數(shù)量將顯色液A與顯色液B按等體積比例混勻配置為底物工作液,現(xiàn)配現(xiàn)用。每孔加100ul,置37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液100μl,混勻,于450nm 測(cè)定各孔吸光值(OD值),
參考值
實(shí)驗(yàn)正常的情況下,陽性對(duì)照OD-陰性對(duì)照OD>0.2。
檢驗(yàn)結(jié)果的解釋
1. S/P=(樣本OD-陰性對(duì)照OD)/(陽性對(duì)照OD-陰性對(duì)照OD)。
2. S/P≥0.4時(shí)結(jié)果判讀為陽性。
3. 0.2<S/P<0.4時(shí)結(jié)果為疑似陽性;若接種過對(duì)應(yīng)疫苗,則提示抗體水平不足,建議補(bǔ)打疫苗。
4. S/P<0.2時(shí)結(jié)果判讀為陰性。
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