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產(chǎn)品型號:
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
訪問量:891
更新時間:2022-09-28
簡要描述:
設(shè)置基線(baseline):一般情況下,對ABI 7500、7700等儀器設(shè)為6-15cycle,對PE5700設(shè)為3-15cycle,對MJ Research Option2設(shè)為6-12cycle。特殊情況可對基線適當(dāng)調(diào)整。設(shè)置閾值(threshold):以閾值線剛超過陰性對照擴增曲線(無規(guī)則的噪音線)的至高點。結(jié)果判斷
產(chǎn)品名稱:豬偽狂犬病病毒野毒株檢測試劑盒
規(guī) 格: 50T
檢測方法: 實時熒光 PCR
保存方式: 2~8℃
有 效 期: 1年
產(chǎn) 地: 中國
用 途: 僅用于科研實驗
訂購流程:豬偽狂犬病病毒野毒株檢測試劑盒
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1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1 樣本前處理
組織:取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿,勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中;
液體標(biāo)本:取適量標(biāo)本13000rpm離心2min,棄上清。
1.2 DNA提取
1) 對上述處理好的標(biāo)本加入40ul 核酸提取液,100℃恒溫處理10分鐘,13,000 rpm離心5分鐘,取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml EP管,-20℃保存;
2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
根據(jù)代檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1
管陰性對照+1管陽性對照),體系配制如下表:
試劑
WSSV 反應(yīng)液
酶液
用量(樣本數(shù)為N)
20μl
1μl
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟1提取的DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μl,加入相應(yīng)的
反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR擴增(核酸擴增區(qū))
4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi);
5. 結(jié)果分析判定
結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置基線(baseline):一般情況下,對ABI 7500、7700等儀器設(shè)為6-15cycle,對PE5700設(shè)為3-15cycle,對MJ Research Option2設(shè)為6-12cycle。特殊情況可對基線適當(dāng)調(diào)整。
設(shè)置閾值(threshold):以閾值線剛超過陰性對照擴增曲線(無規(guī)則的噪音線)的至高點。
結(jié)果判斷
陽性:檢測樣本Ct值小于等于35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長期;
可疑:檢測樣本Ct值大于35.0且小于40.0,重復(fù)一次實驗,如果Ct值仍小于40.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長期,為陽性,否則為陰性;
陰性:檢測不到樣本Ct值或Ct值為40。
6. 對檢驗結(jié)果的解析
實驗室環(huán)境污染,試劑污染,標(biāo)本交叉污染會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;試劑運輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果。
7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品:擴增曲線無對數(shù)生長期或無Ct值顯示;
陽性質(zhì)控品:擴增曲線有明顯對數(shù)生長期,且Ct值≤32;
以上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。
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