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雞白痢雞傷寒抗體檢測試劑盒使用步驟

產(chǎn)品型號:

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

訪問量:954

更新時間:2024-07-04

簡要描述:

雞白痢雞傷寒抗體檢測試劑盒

雞白?。≒ullorum Disease,PD)雞傷寒(Fowl Typhoid,FT)抗體檢測試劑盒檢測雞血清中的雞白痢雞傷寒抗體,用于雞群的雞白痢雞傷寒的血清學(xué)輔助診斷。

本試劑盒采用間接ELISA法,在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被雞白痢雞傷寒抗原。在試驗中,加入稀釋后的待檢血清,經(jīng)過溫育后,若樣品中含有雞白痢雞傷寒特異性抗體,則與包被板上的抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的

詳細(xì)說明:

雞白痢雞傷寒抗體檢測試劑盒

雞白?。?/span>Pullorum Disease,PD)雞傷寒(Fowl Typhoid,FT)抗體檢測試劑盒檢測雞血清中的雞白痢雞傷寒抗體,用于雞群的雞白痢雞傷寒的血清學(xué)輔助診斷。

本試劑盒采用間接ELISA法,在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被雞白痢雞傷寒抗原。在試驗中,加入稀釋后的待檢血清,經(jīng)過溫育后,若樣品中含有雞白痢雞傷寒特異性抗體,則與包被板上的抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶標(biāo)二抗,與檢測板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物;在微孔中加入TMB底物液,經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物,加入終止液終止反應(yīng)后,用酶標(biāo)儀450nm波長測定反應(yīng)孔中的吸光度A值。

組份                    

1

抗原預(yù)包被板條

1/2

7

終止液

6/11ml

2

酶結(jié)合物

11/21ml

8

陰性對照

0.8/1.6ml

3

10倍濃縮洗滌液

50ml

9

陽性對照

0.8/1.6ml

4

底物A液

6/11ml

10

血清稀釋

1/2

5

底物B液

6/11ml

11

封板膜

2/4

6

樣本稀.釋液

50/100ml

12

說明書

1

需自備的設(shè)備及試劑

微量移液器: 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl

一次性移液器吸頭。

量筒:500ml。

96孔板酶標(biāo)儀。

蒸餾水或去離子水。

洗瓶或洗板機。

樣品制備

取動物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血。

洗滌液的準(zhǔn)備

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫,如有鹽結(jié)晶,搖動使結(jié)晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4存放一周左右。

樣品的稀釋

在血清稀釋板中按199的體積比稀釋待檢血清(例如:495μl樣品稀釋液中加5μl待檢血清)。

注意:陰性和陽性對照不用稀釋。取每個樣品后都要更換吸頭,準(zhǔn)確記錄每個樣品在板上的位置。每個樣品在加入到包被板微孔前應(yīng)充分混勻。

注意事項

試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,使用前應(yīng)搖勻,使用后放回2-8

不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時應(yīng)防止試劑污染。

底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時應(yīng)該注意防護(hù)。

TMB(底物B液)不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。

檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于28)。

所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。

嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得很好的結(jié)果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

血清稀釋板為一次性用品,不得重復(fù)使用;血清稀釋板的大容量為300μl/孔。

操作步驟

1. 取預(yù)包被的檢測板(根據(jù)樣品多少,可拆開分次使用),將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中。同時設(shè)陰性、陽性及空白對照各1孔,取陰性及陽性對照各100μl

分別加入反應(yīng)孔中,空白對照僅加入100μl樣本稀.釋液。輕輕振勻孔中樣品(勿溢出)。

2. 蓋上封板膜,置37溫育30分鐘。

3. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,加滿液體后停留1分鐘,后甩去孔內(nèi)液體,以上步驟重復(fù)3次,后在干凈吸水紙上拍干。

4. 每孔加酶結(jié)合物100μl,蓋上封板膜,置37溫育30分鐘。

5. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌3, 方法同3。切記后在干凈吸水紙上拍干。

6. 每孔先加底物液50µl、再加顯色液50µl,混勻、蓋上封板膜37閉光顯色10分鐘。

1. 每孔加終止液50μl,使反應(yīng)終止,10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。

結(jié)果判定

以空白對照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm630nm作參比波長)讀取吸光度A值。試驗成立的條件是陽性對照孔A450值大于或等于0.5,陰性對照孔A450值必須小于0.15。如果試驗無效,試驗中的操作值得懷疑,試驗應(yīng)重做,并仔細(xì)檢察各組分。

樣品A450值大于0.2+陰性對照孔均值,判為陽性;樣品A450值小于0.2+陰性對照孔均值,判為陰性;如陰性對照孔均值小于0.050.05計算。

貯存方法 2 - 8oC下貯存。

有效期 12個月。





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