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禽流.感病毒H7N9亞型檢測試劑盒

產品型號:

廠商性質:生產廠家

訪問量:1071

更新時間:2022-09-27

簡要描述:

禽流.感病毒H7N9亞型檢測試劑盒(雙色實時熒光PCR法)針對AIV-H7N9高度保守區(qū)域設計特異性引物和探針,在反應體系中含AIV-H7N9基因組模板的情況下,PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結果的定性分析。

詳細說明:

禽.流感病毒H7N9亞型檢測試劑盒(雙色實時熒光PCR法)

【包裝規(guī)格】 25頭/& 50頭/

【預期用途】

禽流.感病毒H7N9亞型檢測試劑盒(雙色實時熒光PCR法)利用實時熒光PCR原理,定性檢測禽.流感病毒H7N9亞型(AIV-H7N9),對AIV-H7N9引起的禽.流感診斷和監(jiān)控具有重要指導意義。

【檢驗原理】

禽流.感病毒H7N9亞型檢測試劑盒(雙色實時熒光PCR法)針對AIV-H7N9高度保守區(qū)域設計特異性引物和探針,在反應體系中含AIV-H7N9基因組模板的情況下,PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結果的定性分析。


注:陰性對照為禽類基因組DNA,陽性對照為失去活性的AIV-H7N9病毒cDNA。

【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反復凍融,有效期12個月。

【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。

【樣本要求】

1.樣品取咽喉拭子和泄殖腔拭子,采集方法如下:

咽喉拭子,采取時要將拭子深入喉頭及上顎裂來回刮3次~5次,取咽喉分泌液;將咽喉拭子放人盛有1.0mL生理鹽水的離心管中備用,應避免標本間交叉污染。

2.標本收集后可立即檢測;若不能立即檢測,可置于28冷藏過 夜保存;如需長期保存,標本應凍存于-80℃,避免反復凍融。

【檢驗方法】

1. 試劑準備(試劑準備區(qū))

1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

2)核算當次實驗所需要的反應數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數(shù)(1T+陽性對照數(shù)(1T+誤差預留量(1T+樣本數(shù)

單反液配制表()

RT-PCR反應液

15.0 μL

逆轉錄酶

2.0 μL

Taq

3.0 μL

3)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。

2.樣本準備(樣本處理區(qū))

QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA,具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

   在上述制備好的PCR反應管中分別加入處理好的待測標本RNA5 μl、終體積25 μl/管,蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,轉移到PCR儀器上。

   根據(jù)需要,在上述準備好的PCR反應管中分別加入陰性對照品以及陽性對照品各5 μl,終體積為25 μl/管,蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,轉移到PCR儀器上。

4. PCRPCR擴增區(qū))

1)取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應管,放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置,并記錄放置順序。

2)按下表設置儀器核酸擴增相關參數(shù)進行PCR擴增。

反應體積

25 μL

通道選擇

FAM通道采集 AIV-H7熒光信號

HEX通道采集 AIV-N9熒光信號

PCR

反應

條件

步驟

條件

循環(huán)數(shù)

反轉錄

4210分鐘(min

1

預變性

953分鐘(min

1

預擴增

955秒(s

5

5540秒(s

PCR擴增

955秒(s

40

5540秒(s

(此階段結束時采集熒光信號)

注:ABI系列熒光PCR儀在設置時不選ROX校正,設置淬滅基團選擇None

【參考值(參考范圍)】

1.試劑盒有效性判定:

1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct≤35

2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。

2.標本結果判定:

1陽性:標本檢測結果Ct≤35或有明顯指數(shù)增長期。

2)可疑:標本檢測結果Ct值在3538范圍內。此時應對標本進行重復檢測,如重復實驗結果Ct值仍在3538范圍內,有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。

3)陰性:標本檢測結果Ct值>38或無Ct值。

【檢驗結果的解釋】

通道及檢測結果

標本檢測結果解釋

FAM

HEX

+

+

樣本中檢測出AIV-H7AIV-N9

+

-

樣本中檢測出AIV-H7,未檢測出AIV-N9

-

+

檢測出AIV-N9,未檢測出AIV-H7

-

-

未檢測出AIV-H7AIV-N9。

【檢驗方法的局限性】

1. 當檢測樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的*檢出*可能會發(fā)生假陰性的結果。

2. 被檢樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中操作方式不當容易造成RNA降解而產生假陰性結果。

3. 樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中發(fā)生交叉污染,則容易得到假陽性結果。

【產品性能指標】 產品的*檢出限為102 Copies/mL,產品CV≤5%。

【注意事項】

1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器、耗材應獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。

2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。

3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。

4. 試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻,并應瞬時離心。

5. 試劑盒內所配陰性和陽性對照在第1次使用前應全部轉移至標本準備區(qū),并單獨存放。

6. 為防止熒光干擾,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進行任何標記。




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